通蔚生物土壤脂肪酶(Solid-Lipase，S-LPS)活性試劑盒測(cè)定原理

注 意 ：正式測(cè)定之前選擇 2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義：
LPS 又稱甘油酯水解酶，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和單酯）。LPS 廣泛的存在于
各種生物中。
測(cè)定原理：
LPS 催化油酯水解成脂肪酸，利用銅皂法測(cè)定脂肪酸生成速率，即可計(jì)算 LPS 活性。
自備儀器和用品：
研缽、臺(tái)式離心機(jī)、震蕩混勻器、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、可調(diào)式移液槍、甲
苯 80mL、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制：
標(biāo)準(zhǔn)品：液體 10 μL×1 瓶，10 μmol/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液，4℃保存。臨用前加入 3.168 mL 甲苯，充分溶解。
樣本處理：
建議稱取約 0.1g 土樣，加入 1mL 試劑一進(jìn)行冰浴勻漿，再用回旋式振蕩器振蕩提取 15min，4℃，4000g 離
心 10min，取上清待測(cè)。
S-LPS 測(cè)定操作：
1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 710 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑一和試劑二置于 37℃水浴預(yù)熱 30min。
3. 在 1.5mL EP 管中依次加入下列試劑
37℃振蕩反應(yīng) 5 min 后，靜置 5min，取 200μL 上層液加入微量石英比色皿/96 孔板，于 710nm 處測(cè)定吸光值。
注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。
S-LPS 活性計(jì)算公式：
活性單位定義：37℃中每克土樣每分鐘水解橄欖油生成 1μmol 脂肪酸為一個(gè)酶活單位。
S-LPS (μmol/min/g 土樣) = [C 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測(cè)定管-A 空白管)÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管- A 空白管）]×V 反總÷（W×V 樣
÷V 樣總）÷T=16×[(A 測(cè)定管－A 空白管)÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管- A 空白管）]÷W
C 標(biāo)準(zhǔn)品：10 μmol/mL；V 反總：反應(yīng)總體積，0.8mL；V 樣：反應(yīng)中加入樣本體積，0.05mL；V 樣總：
加入提取液體積，1mL； W：樣本質(zhì)量，g；T：催化反應(yīng)時(shí)間，10 min。
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