抗體是多種免疫測定技術(shù)必不可少的工具。然而，為了使抗體產(chǎn)生可靠的數(shù)據(jù)，它們應(yīng)該對目標(biāo)物種和應(yīng)用中的目標(biāo)分析物具有經(jīng)過證實的特異性。

  抗體是不可或缺的研究試劑

  抗體具有在存在許多其他生物分子的情況下識別和結(jié)合目標(biāo)分析物的獨特能力，是科學(xué)研究不可或缺的工具。根據(jù)其應(yīng)用，抗體可以提供靶標(biāo)量化，識別細(xì)胞和組織中蛋白質(zhì)表達(dá)的空間和時間模式，甚至監(jiān)測結(jié)合事件以確定生物相互作用如何影響細(xì)胞行為。雖然傳統(tǒng)的多克隆抗體和單克隆抗體在研究人員中仍然很受歡迎，但重組抗體的使用率有所提高，因為它們具有出色的批次間一致性，并且相對容易被設(shè)計成不同的形式。此外，抗體片段和合成免疫試劑（如適體和非免疫球蛋白支架）正被研究人員越來越廣泛地使用。

  抗體被歸咎為可重復(fù)性危機的根源

  近年來，用于科學(xué)研究的抗體試劑的質(zhì)量受到質(zhì)疑。2008年的一篇《分子與細(xì)胞蛋白質(zhì)組學(xué)》出版物報道稱，在獨立測試中，只有49%的商業(yè)抗體能夠準(zhǔn)確檢測到其蛋白質(zhì)靶標(biāo)，而2015年的一篇開創(chuàng)性《自然》文章則指出抗體是造成可重復(fù)性危機的主要因素——人們越來越意識到許多科學(xué)實驗的結(jié)果無法重復(fù)(1,2)。考慮到實驗經(jīng)常基于其他實驗室的工作設(shè)計，因此由于抗體性能不穩(wěn)定、不必要的交叉反應(yīng)或用于錯誤的應(yīng)用等因素而導(dǎo)致的不可重復(fù)性是一個嚴(yán)重的問題。這導(dǎo)致制造商驗證抗體的方式以及選擇用于研究的產(chǎn)品的方式發(fā)生了轉(zhuǎn)變。

  抗體驗證的五大支柱有望提高可重復(fù)性

  為了解決可重復(fù)性危機，由瑞典皇家理工學(xué)院MathiasUhlen領(lǐng)導(dǎo)的研究小組于2016年召集了一個特設(shè)的抗體驗證國際工作組(IWGAV)，以定義驗證常見研究應(yīng)用中使用的抗體的最佳實踐。值得注意的是，IGFAW建議抗體驗證遵循以下五大支柱，并建議至少將其中之一納入抗體測試流程，以支持特定應(yīng)用的驗證要求 。

  1.遺傳策略

  遺傳策略涉及比較表達(dá)靶蛋白的樣本與靶蛋白表達(dá)已被基因組編輯或RNA干擾消除或顯著降低的樣本之間的抗體結(jié)合活性。敲除(KO)細(xì)胞系通常用于此類研究。

  2.正交策略

  正交驗證是將基于抗體的目標(biāo)檢測與不依賴抗體的方法進(jìn)行比較的過程。后者的例子包括質(zhì)譜(MS)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)和原位雜交。

  3.獨立抗體策略

  獨立抗體策略直接將正在評估的抗體與針對同一靶標(biāo)進(jìn)行驗證的另一種抗體進(jìn)行比較。對于這種類型的驗證，兩種抗體具有不重疊表位至關(guān)重要。

  4.標(biāo)記蛋白的表達(dá)

  使用融合標(biāo)簽表達(dá)目標(biāo)蛋白可以將抗體信號與標(biāo)簽特異性抗體的信號進(jìn)行比較。這種方法的局限性在于，加入標(biāo)簽可能會改變目標(biāo)蛋白的特性。

  應(yīng)用抗體驗證原則

  抗體驗證的五大支柱受到了科學(xué)界的熱烈歡迎。許多抗體制造商已將這些支柱納入其現(xiàn)有的驗證流程，而研究人員也越來越傾向于尋找已進(jìn)行此類測試的證據(jù)。選擇抗體時，建議您查看產(chǎn)品數(shù)據(jù)表，以獲取實驗證明該抗體適用于您選擇的物種、樣品類型和應(yīng)用。您的購買決定還可能受到有關(guān)抗體的其他信息的指導(dǎo)，例如用于抗體生產(chǎn)的免疫原、同種型和緩沖液配方的詳細(xì)信息，以及用于驗證目的的方案。至關(guān)重要的是，在使用您選擇的抗體試劑時，您應(yīng)該始終在每次進(jìn)行的實驗中包含陽性和陰性對照。